Šta je bakteriološko istraživanje? Po kojoj shemi se provodi? Šta se u ovom slučaju podrazumijeva pod sigurnošću? Koji su ciljevi i faze bakteriološkog istraživanja?
Opće informacije
Bakteriološko ispitivanje je naučni proces u kojem se identifikuju bakterije i proučavaju njihova svojstva kako bi se postavila mikrobiološka dijagnoza. Ovdje je od velike važnosti određivanje vrste ili vrste nastalog mikroorganizma (podrazumijeva se čista kultura). Ovo je popraćeno proučavanjem biohemijskih i fizioloških svojstava organizama, kao i sklonosti stvaranju toksina. U ove svrhe koriste se reakcije precipitacije i aglutinacije. Također se prakticira zaraza laboratorijskih životinja uz naknadno otkrivanje patoloških promjena.
Rad sa testnim materijalom
Algoritam bakteriološke studije omogućava striktno pridržavanje posebnih uputstava. Stoga se ispitni materijal mora sakupljati u sterilne posude u aseptičnim uvjetima. Takođe je potrebno voditi računakako bi se osigurala isporuka u laboratoriju što je prije moguće. Poželjno je skladištenje uzoraka na hladno. Tehnika bakteriološkog istraživanja predviđa mnoge moguće situacije. Dakle, vrsta objekta, svojstva mikroorganizma i priroda bolesti često čine neophodnim izradu individualnih uputstava za rad. U radu se koristi veliki broj različitih metoda. Jedna od najčešćih je bakterioskopija. Ali ako bakterije nisu fiksirane, onda se koristi zgnječena ili viseća kap. Treba napomenuti da posljednje dvije opcije karakterizira povećan nivo zaraznosti.
Bakterioskopija
U ovom slučaju se koriste potezi. Da biste ih stvorili, trebate rasporediti kap tekućine koja se proučava preko površine staklenog tobogana. Zates bi trebao da ga osuši. To se često radi pomicanjem lijeka kroz plamen dobiven iz plinskog plamenika. Iako se smjese za pričvršćivanje mogu koristiti kao alternativa. Za označavanje da su pripremne radnje obavljene sa ovim preparatom, on je obojen. Svrha takve manipulacije je tačnost, što je vrlo važno kada se radi mikroskopski i bakteriološki pregled. Na kraju krajeva, ako ponovo upotrebite lek za drugu svrhu, dobijate kašu, sa kojom će biti veoma teško efikasno raditi.
Zašto je bakterioskopija tako popularna
Ne samo zbog dostupnosti ove metode. Ako se izvrši bakteriološka studija svježeg preparata, tada se utvrđuje patogenmogu se koristiti mikrohemijske reakcije ili selektivno bojenje različitih strukturnih dijelova mikroorganizma. koji je bolji? Točniji rezultat može se dobiti kada se radi sa obojenim preparatom. U ovom slučaju, ispitni materijal se nanosi na prethodno pripremljeno staklo. I obavezno tanak (i ako je moguće ravnomjeran) sloj. Nakon toga morate pričekati da se lijek osuši na zraku. Mikroorganizmi se zatim fiksiraju pomoću jedne od konvencionalnih metoda. Nakon toga, ohlađeni preparat se podvrgava bojenju diferencijalnom ili jednostavnom bojom. Za to se mogu koristiti suhi i nativni preparati. Nakon toga ostaje usmjeriti ultraljubičaste ili kratke plave zrake na mjesto nakupljanja organizama, što uzrokuje da cijeli mikrob ili pojedini dijelovi njegovog tijela sijaju.
Praktična primjena bakterioskopije
Koristi se za dijagnosticiranje brojnih zaraznih bolesti. Najpoznatije od njih su tuberkuloza, gonoreja i povratna groznica. Osim toga, pribjegavaju istraživanju kako bi proučili cijeli kompleks mikroflore organa ili proizvoda. Ali kritičari često ukazuju na relativnu nepouzdanost i nepreciznost ove metode.
Usevi i subkulture bakterijskih kultura
Izvedite ih pomoću Pasteurove pipete. Provođenje bakteriološkog i citološkog pregleda često je teško izvesti bez inokulacije i subkulture u toku rada. Kada radite sa Pasteurom pipetom, njen vrhodlomiti pincetom. Sam alat se zatim provlači kroz plamen gorionika i onda se ostavlja da se ohladi. Inače, za sjetvu se mogu koristiti i tekući i čvrsti hranljivi mediji. Na izbor utječu ciljevi bakteriološkog istraživanja. Istovremeno, potrebno je pridržavati se algoritma rada i sigurnosnih mjera opreza. Dakle, kada radite s tekućim hranjivim medijem, potrebno je osigurati da se ne izlije i da ne navlaži rubove čepa i epruveta. Kada se studija provodi sa čvrstim materijalom, često se koristi posebna igla za ulazak u kulturu. Kada se vrši setva i presijavanje, treba ih obaviti u blizini plamena plinskog plamenika. Zbog čistoće eksperimenta, epruveta ne bi trebalo da ostane otvorena dugo vremena. Što se tiče alata sa kulturom: treba paziti da ništa ne dodiruje. Također, tehnika bakteriološkog istraživanja predviđa spaljivanje rubova epruvete prije zatvaranja. Gotov proizvod treba potpisati odmah nakon proizvodnje kako bi se izbjegla zabuna.
Učinkovitost sjetve
Smatra se da ova metoda omogućava dobijanje tačnijih i pouzdanijih podataka tokom bakteriološke dijagnoze od ranije razmatrane bakterioskopije. U ovom slučaju, algoritam radnji je sljedeći:
- U početku se čista kultura razmazuje po površini hranljive podloge, koja se sipa u Petrijevu posudu.
- Početnu setvu treba obaviti u uslovima koji su povoljni za vrstumikroorganizmi.
- Nakon dan-dva, u prisustvu optimalnog okruženja, sve odgovarajuće kolonije se sele tamo gde se mogu maksimalno razviti. Time se oslobađaju od strane mikroflore.
Krajnji rezultat je kultura homogenih bakterija koja se može identificirati.
Čiste kulture
Ali kako se prave? Za to se koriste biološke i mehaničke metode. U prvom slučaju veliku ulogu igraju hranljivi mediji, gdje postoje potrebni uvjeti pogodni za razvoj određene kulture. Pristup se također može koristiti kada se zaraze laboratorijske životinje osjetljive na određenu vrstu bakterija. Mehaničke metode se zasnivaju na upotrebi sterilnog instrumenta, kojim se kultura stavlja u hranljivi medij koji se nalazi u prvoj, drugoj i trećoj Petrijevoj posudi. Tada je potrebno pričekati da pojedinačne kolonije porastu, a čista kultura će se već izdvojiti iz njih. Bakterije se mogu uzgajati i u posebnim termostatima, gdje se temperatura održava na određenom nivou (obično oko 37 stepeni). U ovom slučaju, proces se nastavlja oko jedan dan. Ali, u zavisnosti od vrste mikroorganizama, mogu se ustanoviti i drugi termini. Takođe je važno prisustvo potrebne koncentracije kiseonika. Da biste to učinili, koristite različite metode prozračivanja. Do sada smo govorili o situaciji u cjelini i općenito, a sada da se fokusiramo na to kakva je shema bakteriološkog istraživanja.
Vježba
Skup metoda se često koristi za otkrivanje patogenih mikroorganizama u tijelu pacijenta ili potencijalnog nosioca. Materijali i metode koje se koriste zavise od ciljeva analize, kao i od uslova sredine u kojoj se rad izvodi. U praksi se najčešće bakterije otkrivaju putem hemokultura uzetih od osobe ili životinje. Ako su lokalne lezije dobro definirane, patogeni se mogu tražiti u problematičnim područjima. To je tipično za bolesti kao što su dizenterija, gonoreja, difterija i niz sličnih. U posebno teškim slučajevima ovaj proces se dijeli na odvojene faze bakteriološkog pregleda (što je tipično za trbušni tifus). Svaki od njih koristi svoje metode, koje su usmjerene na pronalaženje uzroka infekcije. Pogledajmo pobliže situaciju sa tifusnom groznicom. U prvoj sedmici bolesti, najpouzdaniji način za dijagnosticiranje bolesti su hemokulture. Na drugom, takvom se smatra serološka studija. U trećoj sedmici se vrši pregled stolice. Posljednja metoda se smatra provjerom rekonvalescenta.
Identifikacija mikroorganizama
Počinje procesom bojenja. Zatim gledaju kako bakterija može razgraditi ugljikohidrate, aminokiseline i tako dalje. Osim toga, ovaj proces se može dopuniti proučavanjem drugih svojstava koje posjeduje svaki pojedinačni rod ili vrsta mikroorganizama. Kao primjer treba navesti mogućnosti rastvaranja eritrocita različitih životinja, utjecaj na koagulaciju krvne plazme i otapanje ugruška.fibrin i tako dalje. Sve su to različite karakteristike pojedinih predstavnika mikrosvijeta. Također, serološka identifikacija se može koristiti za konačno prepoznavanje (ali to se obično tiče patogenih bakterija koje pripadaju crijevnoj porodici).
Zaključak
Treba napomenuti da se određeni broj mikroorganizama ne može identificirati metodama opisanim u članku. U ovom slučaju se široko koristi praksa zaraze laboratorijskih životinja. Proračun se vrši na osnovu činjenice da će se pojaviti karakteristična toksičnost ili patogenost, koja se ne opaža u umjetnim uvjetima. Infekcija se može koristiti i kao metoda za nakupljanje patogenih mikroba. A već kada se uporede karakteristike proučavane kulture, pronađene u procesu proučavanja bioloških, morfoloških, seroloških i biohemijskih svojstava, možemo reći da se zna o kakvim mikrobima imamo posla. Identifikacija znači indikaciju roda, vrste i tipa bakterije. Ako ispitivani mikroorganizam odstupa u određenim svojstvima od svoje tipične karakteristike, onda se to mora naznačiti. Brojni stručnjaci smatraju da će u takvim slučajevima biti korisno izvršiti ponovnu identifikaciju uz dupliranje svih korištenih metoda i tehnika. Ponekad se istraživanje može podići na viši nivo, što zahtijeva ozbiljniji (i skuplji) pristup. Ako su dobijeni negativni rezultati, onda to ukazuje da je preparatmikroorganizmi su bili odsutni ili nisu bili održivi. Ali radi tačnosti istraživanja, ako se sumnja na veći broj nosilaca bacila (dizenterija, difterija, trbušni tifus), u takvim slučajevima se pokazuju ponovljene kontrole. Ovo je neophodno kako bi stručnjaci imali tačnu predstavu o tome s čime se moraju nositi.
