Hepatitis C je infekcija jetre uzrokovana virusom Flaviviridae HCV, koji se sastoji od jednog ili više RNA molekula. U pravilu se poduzima niz dijagnostičkih mjera kako bi se kod pacijenta ustanovio hepatitis C. PCR je analiza koja tačno potvrđuje dijagnozu. Često zaključak daju ljekari kada pacijent već ima prve znakove bolesti.
Šta je hepatitis C
Oštećenje jetre virusnom infekcijom koja se prenosi krvlju ili seksualnim kontaktom u medicini se naziva hepatitis C. Uzročnik je virus nećelijskih infektivnih agenasa iz porodice Flaviviridae koji sadrži RNK. Infekcija može dugo ostati u tijelu, a da se ne pokaže. Stoga, samo kada se mikroorganizam otkrije testom krvi pomoću PCR RNA RNA, hepatitis C (kao dijagnoza) se smatra opravdanim.
Flavivirus se ne proizvodi u umjetno uzgojenim izoliranim stanicama. U procesu razmnožavanja, infektivni agens stvara imunološki različite modifikacije. Ovi faktori sprečavaju telo da dajeodgovarajući zaštitni odgovor, a stručnjaci imaju poteškoća u razvoju efikasne vakcine.
Virus se prenosi parenteralno. Za infekciju, mora ući u dovoljnim količinama direktno u krvotok.
Koje pretrage se rade na hepatitis C
Virusne patologije jetre dijagnosticiraju se laboratorijskim testovima. Kliničke studije hepatitisa C provode se proučavanjem stranih i opasnih antigena ili proteinskih spojeva (antitijela) u biomaterijalu pacijenta, uglavnom u krvi.
- Enzimatski imunoesej (ELISA). Metoda se zasniva na detekciji lgM antitijela u krvi. Imunoglobulin se smatra najvećim i pentamer je. Manifestuje se primarnom zaštitnom reakcijom limfocita na nepoznatu stranu supstancu.
- Radioimunotest (RIA) - kvantitativno određivanje lgM imunoglobulina korištenjem označenog radioaktivnog izotopa joda.
- PCR hepatitisa C - određivanje virusne RNK u biomaterijalu (krvi). Ova analiza pouzdano potvrđuje dijagnozu.
IgG testiranje nije pouzdano. Njegovo prisustvo u krvnom serumu može ukazivati ne samo na prisustvo flavivirusa, već i na drugu prošlu infekciju koja ima isti patogen.
Šta određuje PCR analizu
Lančana reakcija polimeraze (PCR) se zasniva na identifikaciji DNK regiona specifičnih za određene patogene u uzorcima materijala za istraživanje (epitel, krv). Analiza omogućava identifikaciju najmanjih patogenih organizama (virusa) otkrivanjem njihove RNK ili DNK u biološkom materijalu.
Laboratorijska procedura za detekciju antitela na hepatitis C PCR se izvodi u 3 faze:
- Odaberi. Proučeni biomaterijal se pročišćava od nečistoća i DNK se dobija u mobilnoj fazi hromatografske kolone.
- Amplification. Analiza se vrši u ciklusu uređaj-termostat. Zagreva i hladi epruvete sa određenom cikličnošću. Za jednu studiju izvodi se do 35 ciklusa. Rezultat je dovoljan broj fragmenata DNK za otkrivanje, identifikaciju i procjenu patogena.
- Elektroforeza. Dobijeni fragmenti se stavljaju u gel sa različitom zasićenošću agaroze i vrši se elektroforeza. Dobijeni elektroferogram se analizira na kompjuteru.
Ne koristi se samo standardna PCR studija, već i PCR analiza u realnom vremenu. Ovo je dijagnostika u realnom vremenu. Metoda omogućava kvalitativnu i kvantitativnu analizu, što omogućava utvrđivanje nastanka i dinamike bolesti, kao i propisivanje terapije usmjerene na uklanjanje uzroka nastanka patologije. PCR u realnom vremenu se također koristi za određivanje čiste kulture infektivnih agenasa (genotipizacija).
Kako se radi test lančane reakcije polimerazom
Za dijagnozu se može koristiti bilo koja ljudska biološka tekućina. Biomaterijal za testiranje na hepatitis C je obično krv.
Uzorkovanje za dijagnostiku se vrši u proceduriured. Za vađenje krvi koristite jednokratne epruvete sa supstancom koja inhibira zgrušavanje krvi. Aktivnosti usmjerene na sprječavanje širenja infektivnih agenasa pomažu da se izbjegne ulazak drugog soja mikroorganizama izvana.
Krv za PCR hepatitisa C uzima se ujutro na prazan želudac. Uzorak se odmah šalje u laboratoriju. Dozvoljeno je skladištenje biomaterijala na temperaturi od +4 do +8 stepeni Celzijusa. Kontejneri su označeni i opremljeni uputama. Rezultati testa su dostupni u roku od 48 sati, ponekad i ranije.
Vrste PCR
Raspon primjene lančane reakcije polimeraze je prilično širok. Infekcionisti pomoću PCR utvrđuju hepatitis B, bolesti koje prenose krvosisi insekti, AIDS, tuberkuloza. U onkologiji se ovom metodom tumorske ćelije otkrivaju u ranoj fazi.
Postoji oko četrnaest vrsta analiza. Upotreba jedne ili druge vrste zavisi od obima i konačnih rezultata analiza. Neke vrste PCR-a su neophodne kada je rezultat potreban u roku od 20 minuta.
Za dijagnosticiranje hepatitisa C koriste se 3 vrste polimerazne lančane reakcije:
- Kvalitativna procjena može biti ili pozitivna, što ukazuje na prisustvo infekcije u tijelu, ili negativna, što ukazuje na odsustvo flavivirusa.
- PCR u realnom vremenu (kvantitativna analiza) - određuje kvantitativnu RNK patogena u IU/ml.
- Genotipizacija je analiza koja otkriva tip (genotip) virusa.
Za tačnu identifikaciju i određivanje bolesti, a zatimsve tri vrste studija koriste se za propisivanje optimalne terapije.
Kvalitativna analiza lančane reakcije polimerazom
Analiza je obavezna za sve koji imaju ELISA test koji je otkrio antitijela na HCV. Kvalitativni PCR za hepatitis C je standardni test osjetljivosti. Metoda je usmjerena samo na detekciju, ne vrši se brojanje ili izolacija drugih supstanci.
Za detekciju antitela koriste se specijalni sistemi za testiranje sa pragom osetljivosti od najmanje 50 IU/ml. Ako se otkriju antitijela, propisuju se drugi testovi za razjašnjavanje. Ako je rezultat negativan, dalje testiranje se neće raditi.
U nekim slučajevima, lažno negativan rezultat može biti posljedica nesposobnog laboratorijskog osoblja ili reagensa lošeg kvaliteta. Za osiguranje, bolje je ponoviti analizu na drugom mjestu.
Kvantitativni PCR
Metoda se koristi za direktno proučavanje broja flavivirusa u jednom ciklusu reakcije. Za precizno mjerenje koriste se fragmenti DNK koji se koriste za hibridizaciju ili fluorescentno označeni prajmeri. Postoji ekonomična opcija detekcije pomoću SYBL zelene boje. Boja je uglavljena u mali žleb u DNK i postaje plava kada se ozrači laserom.
Koncentracija se određuje pomoću aparata-pojačala u digitalnom ekvivalentu. Vrijednosti mogu neznatno varirati između laboratorija i stoga ih treba uporediti sa referentnim vrijednostima.
Kvantitativni PCRhepatitis C pomaže u odabiru optimalne doze lijekova i određivanju trajanja terapije. Učestalost istraživanja zavisi od stadijuma bolesti, tipa genotipa i propisanog toka lečenja.
Određivanje genotipa
Virus hepatitisa C ima promjenjivu genetsku strukturu. Brojne modifikacije onemogućavaju stvaranje vakcine, ali i komplikuju terapiju. Identificirano je i evidentirano ukupno 11 genotipova i 100 podtipova. U zemljama bivšeg SSSR-a, kod osoba zaraženih hepatitisom C, PCR uglavnom otkriva genotipove 1b i 3.
U prisustvu bilo kojeg od genotipova, ciroza ili rak jetre mogu se zabaviti. Zato je veoma važno otkriti virus na vrijeme.
Za neke pacijente, određeni lijekovi dizajnirani za borbu protiv HCV-a su toksični. Genotipizacija vam omogućava da odredite vrstu proteina i prepišete efikasan lijek.
U rezultatima testova tipkanja nalazi se broj sa malim latiničnim slovom koji označava genotip virusa. Ako je HCV otkriven, ali nije otkucan, to znači da osoba ima genotip koji nije tipičan za određeno geografsko područje.
Rezultati analize
Doktor se bavi dešifriranjem rezultata. Samo podaci iz nekoliko studija (zajedno sa anamnezom i pregledom) mogu dati opštu stvarnu sliku medicinske istorije.
- Kod zdrave osobe, test za kvalitativne reakcije u biomaterijalu ne otkriva ništa. Ako je naznačena vrijednost "detektovana", infekcija je potvrđena i pacijentpotrebna je dodatna dijagnoza praćena liječenjem.
- Određivanje broja infektivnih agenasa omogućava procjenu virusnog opterećenja organizma. Normalno, kvantitativni PCR hepatitisa C ne otkriva patogena. Indikator do 810^5 smatra se malim opterećenjem i uz odgovarajuću terapiju garantuje povoljan ishod. Više vrijednosti zahtijevaju dubinsko ispitivanje i određivanje dugotrajne terapije, za čiji pozitivan ishod niko ne može jamčiti.
- Pozitivni rezultati genotipizacije pokazuju koji je genotip prepoznat. Negativan rezultat ukazuje ili na odsustvo flavivirusa ili na prisustvo genotipa koji nije tipičan za ovu regiju.
Šta pokazuje pozitivan PCR test
Svaka ozbiljna bolest zahtijeva sveobuhvatnu dijagnozu. Pozitivan PCR na hepatitis C potvrđuje dijagnozu, ali predviđanja se mogu napraviti samo nakon dodatnih laboratorijskih i instrumentalnih studija.
Otkrivanje virusa ne daje potpunu sliku patologije. Potrebno je utvrditi njegovu vrstu i prirodu, utvrditi kako djeluje na jetru i druge organe. Rano otkrivanje HCV-a često ima povoljan terapijski ishod.
Negativan PCR sa pozitivnim ELISA
Kada se posmatraju simptomi karakteristični za oštećenje jetre, postoji velika vjerovatnoća da je infekcija već ušla u organizam. Stoga se trebate obratiti hepatologu ili infektologu. Tokom intervjua, specijalista će prikupiti anamnezu i propisati neophodan pregled.
Akorezultati studija na hepatitis C PCR su negativni, a enzimski imunotest pozitivan, što ukazuje na prisustvo antitijela na flavivirus u krvi. To se obično dešava kada infekcija uđe u organizam u maloj količini, pa se imunološki sistem sam nosi sa njom. Ali takve osobe se i dalje smatraju zaraženima i moraju se pregledati svakih 6 mjeseci. Ako se uz takve rezultate testa osobi uskrati besplatan ljekarski pregled, bolje je uz naknadu uzeti PCR radi očuvanja zdravlja, a ako su rezultati pozitivni kontaktirati specijaliste radi dijagnoze i liječenja.
Prednosti i nedostaci metode
Prilikom postavljanja dijagnoze hepatitisa C, PCR ima nekoliko prednosti:
- Rano otkrivanje patogena.
- Tačna definicija virusa.
- Efikasnost dijagnostike.
- Minimalna stopa greške.
- Visoka osjetljivost.
Nedostaci metode:
- Visoka cijena analize. Test zahtijeva skupu opremu, reagense i visoko kvalifikovano medicinsko osoblje. Sve zajedno daje značajnu količinu.
- Strogi zahtjevi za transport biomaterijala.
Liječenje upale jetre
PCR analiza na virus hepatitisa C smatra se osnovnom za dijagnozu, ali ne i konačnom. Da bi terapija bila efikasna potrebna je niz dodatnih laboratorijskih i instrumentalnih studija. Nakon prolaska svihdijagnostičke mjere koje liječnik propisuje liječenje:
- Dijeta 5 je propisana.
- Alkohol je potpuno isključen.
- Zajednički prijem interferona i ribavirina 25 dana.
- Kursevi hepaprotektora "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- U posebnim slučajevima koristi se diskretna plazmafereza.
Lijekovi koje prepiše hepatolog koriste se redovno, bez promjene doze. Trajanje uzimanja lijekova određuje ljekar nakon prolaska kontrolnih testova. Nakon završenog kursa terapije morate posjetiti ljekara svakih šest mjeseci.
PCR-dijagnostika omogućava identifikaciju uzročnika hepatitisa C u ranoj fazi. To doprinosi efikasnosti terapije i sprečavanju prelaska bolesti u tako opasne oblike kao što su ciroza i hepatocelularni karcinom.
