Laboratorijska dijagnoza gotovo svih infektivnih bolesti zasniva se na otkrivanju antitijela u krvi pacijenta, koja se proizvode protiv antigena patogena, metodom seroloških reakcija. Ušli su u medicinsku praksu od kasnog devetnaestog do početka dvadesetog vijeka.
Razvoj nauke pomogao je da se odredi antigenska struktura mikroba i hemijske formule njihovih toksina. To je omogućilo stvaranje ne samo terapijskih, već i dijagnostičkih seruma. Dobivaju se primjenom atenuiranih patogena laboratorijskim životinjama. Nakon nekoliko dana izlaganja, krv zečeva ili miševa se koristi za pripremu preparata koji se koriste za identifikaciju mikroba ili njihovih toksina serološkim testovima.
Spoljna manifestacija takve reakcije zavisi od uslova njenog nastanka i od stanja antigena u krvi pacijenta. Ako su mikrobne čestice netopive, one se talože, liziraju, vežu ili imobiliziraju u serumu. Ako su antigeni rastvorljivi, tada se javlja fenomen neutralizacije ili precipitacije.
Reakcija aglutinacije (RA)
Test serološke aglutinacije je vrlo specifičan. Lako se izvodi i priličnovizualno, za brzo određivanje prisutnosti antigena u krvnom serumu pacijenta. Koristi se za testiranje Vidalove reakcije (dijagnoza trbušnog tifusa i paratifusa) i Weiglove (tifusne groznice).
Zasnovan je na specifičnoj interakciji između ljudskih antitijela (ili aglutinina) i mikrobnih ćelija (aglutenogena). Nakon njihove interakcije nastaju čestice koje se talože. Ovo je pozitivan znak. Živi ili ubijeni mikrobiološki agensi, gljive, protozoe, krvne ćelije i somatske ćelije mogu se koristiti za uspostavljanje reakcije.
Hemijski, reakcija je podijeljena u dva koraka:
- Specifična veza antitela (AT) sa antigenima (AG).
- Nespecifično - taloženje AG-AT konglomerata, odnosno stvaranje aglutinata.
Indirektna reakcija aglutinacije (IPHA)
Ova reakcija je osjetljivija od prethodne. Koristi se za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih bakterijama, intracelularnim parazitima i protozoama. Toliko je specifičan da se čak i vrlo niske koncentracije antitela mogu detektovati.
Za njegovu proizvodnju koriste se prečišćeni ovčji eritrociti i ljudska crvena krvna zrnca prethodno tretirana antitijelima ili antigenima (u zavisnosti od toga šta laboratorijski tehničar želi da pronađe). U nekim slučajevima, ljudska crvena krvna zrnca se liječe imunoglobulinima. Smatra se da je došlo do seroloških reakcija eritrocita ako su se taložili na dnu epruvete. O pozitivnoj reakcijirecimo kada su ćelije raspoređene u obliku obrnutog kišobrana, koji zauzima cijelo dno. Negativna reakcija se računa ako su se eritrociti smjestili u stupac ili u obliku dugmeta u sredini dna.
Reakcija padavina (RP)
Serološke reakcije ovog tipa koriste se za otkrivanje ekstremno malih čestica antigena. To mogu biti, na primjer, proteini (ili njihovi dijelovi), spojevi proteina s lipidima ili ugljikohidratima, dijelovi bakterija, njihovi toksini.
Serume za reakciju se dobijaju veštačkim zarazom životinja, obično zečeva. Ovom metodom možete dobiti apsolutno bilo koji precipitirajući serum. Postavka seroloških reakcija precipitacije je po mehanizmu djelovanja slična reakcijama aglutinacije. Antitela sadržana u serumu kombinuju se sa antigenima u koloidnom rastvoru, formirajući velike proteinske molekule koje se talože na dnu epruvete ili na supstratu (gelu). Ova metoda se smatra vrlo specifičnom i može otkriti čak i zanemarljive količine supstance.
Koristi se za dijagnosticiranje kuge, tularemije, antraksa, meningitisa i drugih bolesti. Osim toga, on je uključen u sudsko-medicinski pregled.
reakcija precipitacije gela
Serološke reakcije se mogu izvesti ne samo u tečnom mediju, već iu agar gelu. Ovo se zove metoda difuzne precipitacije. Uz njegovu pomoć proučava se sastav složenih antigenskih mješavina. Ova metoda se zasniva na hemotaksiji antigena na antitijela i obrnuto. U gelu se krećujedni prema drugima različitim brzinama i, susrećući se, formiraju linije padavina. Svaki red je jedan set AG-AT.
Reakcija neutralizacije egzotoksina sa antitoksinom (PH)
Antitoksični serumi mogu neutralizirati djelovanje egzotoksina koji proizvode mikroorganizmi. Ove serološke reakcije se temelje na tome. Mikrobiologija koristi ovu metodu za titriranje seruma, toksina i toksoida i određivanje njihove terapeutske aktivnosti. Snaga neutralizacije toksina određena je konvencionalnim jedinicama - AE.
Osim toga, zahvaljujući ovoj reakciji, moguće je odrediti vrstu ili vrstu egzotoksina. Koristi se u dijagnostici tetanusa, difterije, botulizma. Studija se može izvesti i "na staklu" i u gelu.
Reakcija lize (RL)
Imuni serum, koji ulazi u organizam pacijenta, pored svoje glavne funkcije pasivnog imuniteta, ima i svojstva lizanja. U stanju je da otopi mikrobne agense, ćelijske strane elemente i viruse koji ulaze u tijelo pacijenta. U zavisnosti od specifičnosti antitela uključenih u serum, izoluju se bakteriolizini, citolizini, spirohetolizini, hemolizini i drugi.
Ova specifična antitijela se nazivaju "komplement". Nalazi se u gotovo svim ljudskim tjelesnim tekućinama, ima složenu proteinsku strukturu i izuzetno je osjetljiv na porast temperature, tresenje, kiseline i direktnu sunčevu svjetlost. Ali u osušenom stanju može se zadržatinjegova svojstva lize do šest mjeseci.
Postoje ove vrste seroloških reakcija ovog tipa:
- bakterioliza;
- hemoliza.
Bakterioliza se provodi korištenjem krvnog seruma pacijenta i specifičnog imunološkog seruma sa živim mikrobima. Ako je u krvi prisutno dovoljno komplementa, tada će istraživač vidjeti kako se bakterija lizira, a reakcija će se smatrati pozitivnom.
Druga serološka reakcija krvi je da se suspenzija crvenih krvnih zrnaca pacijenta tretira serumom koji sadrži hemolizine, koji se aktiviraju samo u prisustvu određenog komplimenta. Ako postoji, tada laboratorijski asistent promatra otapanje crvenih krvnih zrnaca. Ova reakcija se široko koristi u modernoj medicini za određivanje titra komplementa (odnosno njegove najmanje količine koja izaziva lizu eritrocita) u krvnom serumu i za analizu za fiksaciju komplementa. Na taj način se vrši serološki test na sifilis - Wassermanova reakcija.
Reakcija fiksacije komplementa (CFR)
Ova reakcija se koristi za otkrivanje antitijela na infektivni agens u krvnom serumu pacijenta, kao i za identifikaciju patogena po njegovoj antigenskoj strukturi.
Do ove tačke smo opisali jednostavne serološke reakcije. RSK se smatra složenom reakcijom, jer u njoj ne djeluju dva, već tri elementa: antitijelo, antigen i komplement. Njegova suština leži u činjenici da je interakcija između antitijela i antigenajavlja se samo u prisustvu proteina komplementa, koji se adsorbuju na površini formiranog AG-AT kompleksa.
Sami antigeni, nakon dodavanja komplementa, prolaze kroz značajne promjene, što pokazuje kvalitet reakcije. To može biti liza, hemoliza, imobilizacija, baktericidno ili bakteriostatsko djelovanje.
Sama reakcija se odvija u dvije faze:
- Formiranje kompleksa antigen-antitelo koje nije vizuelno vidljivo ispitivaču.
- Promena antigena pod dejstvom komplementa. Ova faza se najčešće može pratiti golim okom. Ako reakcija nije vizuelno vidljiva, tada se koristi dodatni sistem indikatora za identifikaciju promjena.
Sistem indikatora
Ova reakcija se zasniva na fiksaciji komplementa. Pročišćeni ovnski eritrociti i hemolitički serum bez komplementa dodaju se u epruvetu sat vremena nakon postavljanja RSC. Ako nevezani komplement ostane u epruveti, tada će se spojiti s AG-AT kompleksom formiranim između ovčijih krvnih stanica i hemolizina i uzrokovati njihovo rastvaranje. To će značiti da je RSK negativan. Ako su eritrociti ostali netaknuti, onda je, shodno tome, reakcija pozitivna.
Test hemaglutinacije (RGA)
Postoje dvije fundamentalno različite reakcije hemaglutinacije. Jedan od njih je serološki, koristi se za određivanje krvnih grupa. U ovom slučaju, crvena krvna zrnca stupaju u interakciju s antitijelima.
I drugireakcija se ne odnosi na serološke, jer crvena krvna zrnca reagiraju s hemaglutininima koje proizvode virusi. Budući da svaki patogen djeluje samo na specifične eritrocite (piletina, jagnjetina, majmun), ova reakcija se može smatrati visoko specifičnom.
Možete reći da li je reakcija pozitivna ili negativna prema lokaciji krvnih stanica na dnu epruvete. Ako njihov uzorak podsjeća na obrnuti kišobran, tada je željeni virus prisutan u krvi pacijenta. A ako su se svi eritrociti formirali kao novčić, onda nema željenih patogena.
Test inhibicije hemaglutinacije (HITA)
Ovo je vrlo specifična reakcija koja vam omogućava da odredite vrstu, vrstu virusa ili prisustvo specifičnih antitijela u krvnom serumu pacijenta.
Njegova suština leži u činjenici da antitela koja se dodaju u epruvetu sa test materijalom sprečavaju taloženje antigena na eritrocitima, čime se zaustavlja hemaglutinacija. Ovo je kvalitativni znak prisustva u krvi specifičnih antigena za specifični virus koji se traži.
Imunofluorescentna reakcija (RIF)
Reakcija se zasniva na sposobnosti detekcije AG-AT kompleksa pomoću fluorescentne mikroskopije nakon njihovog tretmana fluorohromnim bojama. Ova metoda je laka za rukovanje, ne zahtijeva izolaciju čiste kulture i oduzima malo vremena. Neophodan je za brzu dijagnostiku zaraznih bolesti.
U praksi se ove serološke reakcije dijele na dva tipa: direktne i indirektne.
Direct RIF se proizvodi odantigen, koji je prethodno tretiran fluorescentnim serumom. A indirektna je da se prvo lijek tretira konvencionalnim dijagnostikumom koji sadrži antigene za antitijela od interesa, a zatim se ponovo aplicira luminiscentni serum koji je specifičan za proteine AG-AT kompleksa i mikrobne ćelije postati vidljiv pod mikroskopom.
