Odnedavno je razvijena pouzdana, vrlo osjetljiva i brza metoda za dijagnosticiranje različitih zaraznih bolesti ljudi. Ova metoda se zove "PCR analiza". Šta je to, koja je njegova suština, koje mikroorganizme može otkriti i kako ga pravilno uzimati, reći ćemo u našem članku.
Historija otkrića
Izmislio metodu lančane reakcije polimeraze (PCR) od strane američkog naučnika Kary Mullis 1983. U početku je dijagnostičku metodu patentirala Cetus Corporation, u kojoj je radio njen tvorac. Ali 1992. sva prava i patenti su prodati Hoffman-La Rocheu. Nakon toga se ispostavilo da su slične studije rađene paralelno i da su ih snimili i drugi američki biolozi, poput Alice Chen, Davida Edgara, Johna Trella. Godine 1980. sovjetski naučnici A. Sljusarenko, A. Kaledin i S. Gorodecki su se takođe bavili ovim problemom. Stoga je bilo nemoguće utvrditi jedinog nosioca autorskog prava. Mnogi istaknuti biohemičari dali su određeni doprinos razvoju tehnike polimerazne lančane reakcije i patentirali svoje inovacije. Trenutno, analizaPCR se izvodi svuda u posebno opremljenim laboratorijama.
Suština PCR dijagnostičke metode
PCR analiza: šta je to i kako funkcionira? Suština metode je povećanje volumena određene mikrobne sredine u umjetnim uvjetima pomoću posebnog enzima DNK polimeraze. Za to se postojeći DNK materijal višestruko umnožava. Dakle, u prisustvu patogenog mikroorganizma u uzorku, njegova količina će biti povećana zbog biohemijskih laboratorijskih manipulacija, te neće biti teško otkriti bakteriju pod mikroskopom.
Kako se vrši istraživanje materijala?
Potrebno za analizu:
- DNK matrica;
- prajmeri koji povezuju krajeve komada materijala;
- enzim DNK polimeraze otporan na toplinu;
- hemikalije koje čine da enzimi rade ispravno;
- puferski rastvor neophodan za stvaranje odgovarajućih uslova za rast i razvoj DNK materijala.
Za izvođenje PCR-a izvodi se 25-30 ponavljanja, koje se sastoje od tri faze: denaturacija, žarenje i elongacija.
Za analizu polimerne lančane reakcije koristi se poseban uređaj - pojačalo. Savremena oprema omogućava postavljanje potrebnog programa za cijevi za grijanje i hlađenje kako bi se eliminisale greške tokom dijagnostike.
Gdje se koristi dijagnostika?
Metoda polimerne lančane reakcije koristi se u raznim oblastima medicine:
- kriminalisti saidentifikuje genetski materijal kao što je kosa, pljuvačka ili krv;
- PCR krvni test pomaže kod genotipizacije, na primjer, da se otkrije individualna genetski inherentna reakcija na određeni lijek;
- koristeći ovu metodu za utvrđivanje prisutnosti porodičnih veza među ljudima;
- Najpopularnija PCR metoda je postala u medicinskoj dijagnostici za određivanje različitih zaraznih bolesti.
Koje infekcije otkriva PCR?
Dakle, medicina dugo i uspješno koristi PCR analizu. Šta je to, već znamo. I koji se patogeni mogu otkriti s njim? PCR metodom dijagnosticiraju se sljedeće zarazne bolesti:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplazmoza;
- kandidijaza;
- hlamidija;
- mikoplazmoza;
- gardnereloza;
- infektivna mononukleoza;
- trihomonijaza;
- infekcija papiloma virusom;
- tuberkuloza;
- herpes infekcija tipovi 1 i 2;
- helikobakterioza;
- citomegalovirus;
- difterija;
- salmoneloza;
- HIV infekcija.
Takođe, PCR metode se koriste u dijagnostici raka.
Prednosti metode
PCR dijagnostika ima nekoliko prednosti:
- Visoka osjetljivost. Čak i u prisustvu samo nekoliko molekula DNK mikroorganizma, PCR analiza utvrđuje prisustvo infekcije. Metoda će pomoći kod kroničnih i latentno nastalih bolesti. Često u takvim slučajevima mikroorganizaminače se ne može kultivisati.
- Bilo koji materijal je pogodan za istraživanje, kao što su pljuvačka, krv, genitalni sekret, kosa, epitelne ćelije. Najčešća je analiza krvi i urogenitalnog razmaza za PCR.
- Nije potreban dugoročni usev. Automatski dijagnostički proces vam omogućava da dobijete rezultate studije nakon 4-5 sati.
- Metoda je skoro 100% pouzdana. Zabilježeni su samo izolirani slučajevi lažno negativnih rezultata.
- Mogućnost identifikacije nekoliko vrsta patogena iz jednog uzorka materijala. Ovo ne samo da ubrzava proces dijagnosticiranja bolesti, već i značajno smanjuje materijalne troškove. Često liječnik propisuje sveobuhvatnu PCR analizu. Cijena pregleda, koji se sastoji od određivanja šest uzročnika bolesti, iznosi oko 1.500 rubalja.
Preporuke za pripremu za analizu
Da bi rezultati bili pouzdani tokom PCR studije, potrebno je da uradite test, poštujući preporuke za preliminarnu pripremu za dijagnozu:
- Prije doniranja pljuvačke, trebali biste se suzdržati od jela i uzimanja lijekova 4 sata prije uzorkovanja. Neposredno prije zahvata isperite usta prokuhanom vodom.
- Navedena pravila treba se pridržavati i prilikom uzimanja uzorka sa unutrašnje površine obraza. Nakon ispiranja preporučuje se lagana masaža kože kako bi se istakla izlučivanje žlijezde.
- Urin se obično skuplja kod kuće. Da biste to učinili, morate obaviti temeljit toaletgenitalijama. Sakupite 50-60 ml urina u sterilnu plastičnu posudu. Da bi se osigurala čistoća materijala, ženama se preporučuje da ubace tampon u vaginu, a muškarcima da što više povuku kožni nabor. Nemojte donirati tokom menstruacije.
- Da biste donirali spermu, morate se suzdržati od seksualnih odnosa 3 dana prije uzorkovanja. Lekari takođe savetuju odlazak u saunu i toplu kupku, konzumiranje alkohola i začinjenu hranu. Morate se suzdržati od mokrenja 3 sata prije testa.
- Za uzimanje urogenitalnog brisa, na primjer, ako se radi PCR test na klamidiju, ženama i muškarcima se savjetuje seksualni odmor 3 dana. Antibakterijske lijekove ne treba uzimati 2 sedmice prije analize. Na tjedan dana morate prestati koristiti intimne gelove, masti, vaginalne supozitorije, ispiranje. 3 sata prije pregleda morate se suzdržati od mokrenja. Za vrijeme menstruacije, uzorkovanje se ne vrši, samo 3 dana nakon prestanka krvarenja možete uzeti urogenitalni bris.
PCR tokom trudnoće
U periodu očekivanja bebe, mnoge polno prenosive infekcije su izuzetno opasne za normalan razvoj fetusa. Polno prenosive bolesti mogu izazvati intrauterino usporavanje rasta, pobačaj ili prijevremeni porod, kongenitalne malformacije djeteta. Stoga je izuzetno važno podvrgnuti se PCR pregledu u ranoj trudnoći. Potrebno je proći analizu prilikom registracije - do 12 sedmica.
Materijal se posebnom četkom uzima iz cervikalnog kanala. Postupak je bezbolan i ne predstavlja opasnost za bebu. Obično se tokom trudnoće vrši analiza na klamidiju PCR metodom, kao i na ureaplazmozu, mikoplazmozu, citomegalovirus, herpes, papiloma virus. Takav kompleks ispitivanja naziva se PCR-6.
PCR za dijagnozu HIV-a
Zbog činjenice da je metoda lančane reakcije polimerazom veoma osjetljiva na promjene u tijelu i na uslove dijagnoze, na rezultat mogu uticati mnogi faktori. Stoga PCR analiza na HIV infekciju nije pouzdana metoda, njena efikasnost je 96–98%. U preostalih 2-4% slučajeva test daje lažno pozitivne rezultate.
Ali u nekim situacijama, HIV PCR dijagnostika je neophodna. Obično se daje osobama sa lažno negativnim ELISA rezultatom. Takvi pokazatelji ukazuju da osoba još nije razvila antitijela na virus i da se ne mogu otkriti bez višestrukog povećanja broja. Upravo to se može postići provođenjem PCR testa krvi.
Ova dijagnostika je neophodna i za djecu prve godine života rođenu od HIV pozitivne majke. Metoda je jedini način da se pouzdano utvrdi status djeteta.
PCR za dijagnosticiranje hepatitisa
Metoda lančane reakcije polimerazom omogućava otkrivanje DNK virusa hepatitisa A, B, C mnogo prije formiranja antitijela na infekciju ili pojave simptoma bolesti. PCR analiza na hepatitis C je posebno efikasna, jer je u 85% slučajeva ova bolest asimptomatska i bezpravovremeni tretman prelazi u hroničnu fazu.
Pravovremeno otkrivanje patogena pomoći će da se izbjegnu komplikacije i dugotrajno liječenje.
Sveobuhvatni PCR pregled
Složena PCR analiza: šta je to? Ovo je pregled metodom polimerne lančane reakcije, koji uključuje istovremeno određivanje više vrsta infekcija: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes gonorrhes tipovi 1 i 2, papiloma virusa. Cijena takve dijagnostike kreće se od 2000 do 3500 rubalja. ovisno o klinici, korištenim materijalima i opremi, kao i o vrsti analize: kvalitativna ili kvantitativna. Šta je potrebno u vašem slučaju - odlučiće lekar. U nekim slučajevima dovoljno je samo utvrditi prisutnost patogena, u drugima, na primjer, kod HIV infekcije, kvantitativni titar igra važnu ulogu. Prilikom dijagnosticiranja svih gore navedenih patogena, pregled se naziva "PCR-12 analiza".
Transkript rezultata analize
Dešifrovanje PCR analize nije teško. Postoje samo 2 skale indikatora - "pozitivan rezultat" i "negativan rezultat". Kada se otkrije patogen, liječnici mogu potvrditi prisutnost bolesti sa sigurnošću od 99% i započeti liječenje pacijenta. Kod kvantitativne metode za određivanje infekcije, odgovarajuća kolona će ukazati na numerički indikator otkrivenih bakterija. Samo ljekar može utvrditi obim bolesti i propisati neophodan tretman.
U nekim slučajevima, na primjer, prilikom utvrđivanja HIV infekcije putem PCR-a, sa negativnim rezultatom, postaje potrebno provesti dodatna ispitivanja kako bi se potvrdili dobijeni pokazatelji.
Gdje se testirati?
Gdje napraviti PCR test: u javnoj klinici ili u privatnoj laboratoriji? Nažalost, u opštinskim zdravstvenim ustanovama oprema i metode su često zastarele. Stoga je bolje dati prednost privatnim laboratorijama sa modernom opremom i visokokvalificiranim osobljem. Osim toga, u privatnoj klinici rezultate ćete dobiti mnogo brže.
U Moskvi mnoge privatne laboratorije nude PCR analizu za razne infekcije. Na primjer, u takvim klinikama kao što su Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, provodi se PCR analiza. Cena pregleda je od 200 rubalja. za identifikaciju jednog patogena.
Može se zaključiti da je dijagnoza zaraznih bolesti PCR-om u većini slučajeva brz i pouzdan način otkrivanja patogena u organizmu u ranim fazama infekcije. Ali ipak, u određenim slučajevima vrijedi odabrati druge dijagnostičke metode. Samo stručnjak može odrediti potrebu za takvom studijom. Dešifrovanje PCR analize takođe zahteva profesionalan pristup. Pridržavajte se savjeta ljekara i nemojte raditi testove koji vam nisu potrebni.
