Kolorimetrijska metoda - analiza zasnovana na poređenju zasićenosti boja ispitivanih i poznatih supstanci. Rezultati fizičkih i hemijskih testova su od velike vrednosti za mnoge grane nauke, ali najviše od svega istraživanja se koriste u medicini.
Suština kolorimetrijske metode
Postoje mnoge vrste testova koji određuju hemijski sastav supstanci. Neki od njih su univerzalni i široko se koriste u različitim oblastima, drugi su specifični, sa većom preciznošću. Kolorimetrijska metoda je univerzalna.
Suština analize leži u činjenici da se zasićenost boje rastvora nepoznate koncentracije poredi sa bojom standardnog rastvora. Tokom analize, kao rezultat interakcije ispitivane komponente sa određenim reagensom, nastaje obojeno jedinjenje. Nakon završetka reakcije, dobijena nijansa se upoređuje sa bojom rastvora čija je koncentracija već poznata.
Smatra se da je osnivač kolorimetrije Robert Boyle. Koristio je stisaktanini za razlikovanje željeza od bakra u otopini. Boyle je primijetio da što je veća koncentracija željeza u otopini, to je ton potonjeg bogatiji.
Kolorimetrija
Kolorimetrija je metoda za određivanje količine supstance u rastvorima. Analiza se zasniva na Bouguer-Lambert-Beerovom zakonu: kada svjetlosni snop udari u gusti apsorbirajući sloj tvari, njegov intenzitet slabi.
Kolorimetrijska metoda za određivanje koncentracije supstance može koristiti vizuelno poređenje ili poređenje pomoću posebnih instrumenata za mjerenje intenziteta boje. Poređenje se vrši na direktan i kompenzatorski način.
- Ravno. Metoda uključuje poređenje nivoa boje ispitnog rastvora pri određenoj gustini i temperaturi tečnosti sa referentnim rastvorom. Kada se koriste fotokolorimetri i spektrofotometri, kao referentna otopina koristi se destilovana voda. Uređaji mjere jačinu struje, koja zavisi od intenziteta svjetlosti.
- Compensatory. Metoda se zasniva na dovođenju boje ispitivanog uzorka na referentnu. Rezultat se postiže dodavanjem rastvarača ili povećanjem visine sloja obojenog medija.
Upotreba spektrofotometra, monohromatora i drugih preciznih instrumenata dodatno pojednostavljuje već jednostavnu metodu istraživanja i omogućava vam da povećate tačnost rezultata. Ovi uređaji mogu mjeriti količinu prijenosa svjetlosti i odrediti talasnu dužinu.
Gdje se primjenjuje analiza
Kolorimetrijska metoda analize koristi se kada je poznat tačan hemijski sastav, postoji referentni uzorak za poređenje, a temperatura ispitnog i referentnog uzorka je ista. Ako trebate brzo odrediti količinu obojene tvari, ali je toliko mala da je nemoguće primijeniti analitičku metodu.
Kolorimetrija se široko koristi u medicini za klinička biohemijska istraživanja i druga područja:
- farmaceutska industrija;
- prehrambena i alkoholna industrija;
- agronomija (određivanje kvaliteta tla).
Za i protiv
Kolorimetrijska metoda, kao i svaka druga, ima prednosti i nedostatke.
Prednosti uključuju sljedeće:
- jednostavnost analize, minimalne pripremne procedure;
- mogućnost testiranja čak i sa malom količinom testnog materijala;
- nema potrebe za skupom opremom, iako se u posljednje vrijeme sve više koriste savremeni uređaji koji nisu jeftini. Ali daju najprecizniji rezultat.
Nedostaci: niska tačnost analize u poređenju sa analitičkim metodama.
Biuret metoda za određivanje proteina
Proteini u krvnom serumu su indikator koji odražava stanje homeostaze. Povećanje koncentracije makromolekularnog jedinjenja u krvi naziva se hiperproteinemija, a nizak sadržaj se naziva hipoproteinemija.
Proteini uKrvni serum ima drugačiji sastav, strukturu, svojstva, obavlja različite funkcije. Dijele se na enzime, hormone, imunoglobuline i druge. Sve grupe proteina imaju niz zajedničkih karakteristika, na osnovu kojih su razvijene metode za određivanje makromolekularnih organskih jedinjenja u biološkim tečnostima.
Od svih metoda u kliničkoj biohemiji, najčešće se koriste kolorimetrijske metode za određivanje proteina. Relativno su jeftini, što je važno za budžetske organizacije. i prilično su jednostavni. Najčešća je biuretska metoda. Suština metode: proteini u alkalnoj sredini reaguju sa bakar sulfatom i formiraju ljubičasta jedinjenja. Sadržaj proteina u krvi određen je zasićenošću bojenja. Biomaterijal za analizu uzima se ujutro na prazan želudac.
Analiza je vrlo precizna, ali postoje faktori koji utiču na koncentraciju proteina u krvi:
- fizička aktivnost neposredno prije uzorkovanja biomaterijala;
- poslednje sedmice trudnoće i dojenja;
- primjena lijekova Corticotropin, Miscleron, Clofibrate povećava sadržaj proteina u krvi, a upotreba pirazinamida i estrogena - za smanjenje koncentracije;
- pogrešan položaj ruke tokom uzorkovanja biomaterijala.
Određivanje željeza
Količina gvožđa u krvi jedan je od glavnih pokazatelja u dijagnostici raznih bolesti. Supstanca je koncentrirana u hemoglobinu, koji osigurava transport kisika do tkiva. Zaodređivanje željeza kolorimetrijskom metodom, najčešće se kao glavni reagens koristi otopina batofenantrolina (0,02%). Biomaterijal - serum bez tragova hemolize.
Suština metode: interakcija iona željeza i sulfatnog batofenantrolina formira obojeni kompleks, čija se zasićenost određuje fotometrijski. Da bi se dobilo čisto rješenje, potrebno je pridržavati se pravila za uzorkovanje biomaterijala, ali da bi se precizno odredile optičke gustoće kompleksa željezo-ligand, željezo se oslobađa iz hemoglobina pomoću hidroksilamina i deterdženata (natrijum dodecil sulfat). Rezultat testa utvrđuje prisustvo i stepen patologije. Normalna koncentracija gvožđa bi trebala biti:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (muškarci);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (žene).
Nedostatak gvožđa je obično povezan sa gubitkom krvi, neadekvatnim unosom ishrane ili slabom apsorpcijom iz gastrointestinalnog trakta.
test holesterola
Kolesterol je organska supstanca koja se nalazi u ćelijskom zidu mnogih organizama, uključujući i ljude. Neophodan je za proizvodnju holekalciferola i steroidnih hormona. Normalnim se smatra nivo holesterola od 3,37-5,2 mmol/L. Povišeni sadržaj je jedan od glavnih uzroka ateroskleroze.
Kolorimetrijske metode za određivanje holesterola omogućavaju vam da prepoznate vaskularne bolesti u ranoj fazi. Prema patoanatomskim rezultatima u smrtnom ishodu ishemije, koncentracija lipofilnog alkohola u bolesnikabio 6,5-7,8 mmol/L.
Princip kolorimetrijske metode je da kolesterol oksidira 3beta-hidroksi-steroid oksidoreduktaza, oslobađajući vodikov peroksid, koji pretvara p-aminoatipirin u obojeno jedinjenje. Sadržaj holesterola je određen zasićenošću njegove boje.
Prilikom provođenja testa kod djeteta, mora se voditi računa da koncentracija kolesterola u djetinjstvu ne smije prelaziti 4,1 mmol/l.
Šta je enzimska kolorimetrijska metoda?
Enzimatski testovi se zasnivaju na upotrebi reakcija enzima sa visokom aktivnošću. Oni se široko koriste u analitičkoj hemiji za određivanje različitih supstanci - od nitratnih jona do makromolekula.
Enzimatske (enzimske) metode su specifične, omogućavaju analizu određenih supstanci u prisustvu drugih supstanci sličnih sastava. Najčešći metodi zasnovani su na upotrebi enzima - glukoza oksidaze. Test se koristi za određivanje koncentracije glukoze u krvi. Preciznost testa omogućava da se koristi za prilagođavanje doze hipoglikemijskih sredstava kod pacijenata sa dijabetesom tipa 2.
Metoda oksidansa glukoze smatra se jednom od najboljih kvantitativnih metoda za određivanje glukoze. Kao biomaterijal se mogu koristiti i krv (kapilara) i serum, ali je plazma poželjnija jer ima niži sadržaj hematokrita, što negativno utiče na tačnost rezultata.
Uglavnom se koristi kinetička metoda fotometrije. Njegova suština leži u činjenici dautvrđenim omjerom glukoza oksidaze i peroksidaze, za određeno vrijeme nakon početka reakcije, brzina formiranja obojenog spoja će biti srazmjerna nivou glukoze u uzorku. Glavna prednost testa je da na rezultat ne utiče prisustvo jedinjenja treće strane u uzorku. Metoda ima i nedostatak - za ispitivanje su potrebni skupi mjerni instrumenti njemačkih ili švedskih proizvođača.
Zaključak
Kolorimetrijska metoda je precizna i laka za korištenje. Njegova upotreba u medicini omogućava rano otkrivanje različitih patoloških promjena u organizmu. Uvođenjem novih tehnologija metoda se unapređuje i postaje sve popularnija.
