Prema statistici SZO, u proteklih 40 godina, 25 miliona ljudi je umrlo od side. Šteta od ove infekcije je ogromna. Ispostavilo se da je većina zaraženih u Africi, odakle je i došla ova infekcija. Kod HIV-a, dijagnoza bolesti postaje posebno relevantna. Istina, još uvijek nema lijekova za HIV, ali rano liječenje može produžiti život pacijenta i poboljšati njegovu kvalitetu.
Dijagnoza HIV infekcije
HIV infekcija se utvrđuje u različitim fazama sljedećim metodama:
- ELISA - enzimski imunotest.
- Western blot.
- PCR - lančana reakcija polimeraze.
- Brzi testovi.
PCR metodu je razvio američki biohemičar Kary Mullis, koji je za nju dobio Nobelovu nagradu 1983. godine. Danas se ova metoda u medicini u dijagnostici svih infekcija smatra vodećom zbog svoje tačnosti i informativnosti. HIV nije izuzetak u ovom pogledu.
Suština analize
Svaka živa ćelija sadrži RNK i DNK. Ove nukleinske kiseline su sposobne za samokopiranje i samoreplikaciju. Za svaku infekciju, fragmenti DNK su jedinstveni. ATu biološkim tečnostima ovi fragmenti nukleinskih kiselina cirkulišu. Hvata ih i prepoznaje posebna oprema - reaktor. Ovo je osnova metode. Laborant prebrojava ove fragmente. Retrovirus HIV se prati na RNK. Čak i sa pojedinačnim kopijama virusnih čestica, PCR ih može otkriti i izbrojati.
Venska krv se najčešće koristi kao testna tečnost. Posebne komponente metode vežu se za čestice virusa i čine ih vidljivim, jer se pronađeni fragmenti umnožavaju.
U slučaju HIV-a, rezultat prisustva virusa može se dobiti mnogo prije nego što se pojavi klinika. Stoga, zbog svoje visoke osjetljivosti, PCR ima tako visoku dijagnostičku vrijednost. Ogroman plus PCR-a je svestranost metode. Period inkubacije infekcije za PCR nije prepreka.
Cijena istraživanja
PCR metoda je prilično skupa. Ovo je jedan od njegovih velikih nedostataka. Zahtijeva najnoviju opremu i visoko kvalifikovanog laboratorijskog asistenta. S obzirom na navedeno, PCR dijagnostika se ne radi u malim naseljima. Možete se testirati samo u specijalizovanim velikim klinikama.
Cijena testiranja HIV DNK u moskovskim klinikama kreće se od 2.800 rubalja, virusno opterećenje (virusna RNK u plazmi) se određuje PCR-om - od 8.800 rubalja, a otpornost HIV-a na inhibitore proteaze - od 16.500 rubalja. Kao što vidite, cijene su prilično visoke. PCR se može uraditi besplatno u javnim klinikama u skladu sa polisom MHI. Bitan,da se postupak može obaviti anonimno. U registru pacijent dobiva broj po kojem može saznati rezultat. U savremenim medicinskim centrima postoje lični računi klijenata na koje će se unositi ovi podaci.
Ciljevi istraživanja
PCR dijagnostika za HIV se propisuje u takvim slučajevima:
- Otkrivanje infekcije kod djeteta rođenog od bolesne majke ili nosioca radi utvrđivanja intrauterine infekcije.
- Ako je ELISA dala upitne rezultate (PCR za HIV pomaže u ovom slučaju da se postavi konačna dijagnoza).
- Za otkrivanje kvantitativnog sadržaja virusa u tijelu.
- Sa pozitivnim imunoblotom, oni se međusobno nadopunjuju pomoću PCR-a.
- Testiranje donatora.
- Za ranu dijagnozu HIV-a.
- Za određivanje efikasnosti i otpornosti na ART.
Prednost ove analize je da se PCR na HIV može uraditi čak i za djecu mlađu od godinu dana.
Istraživanje se često radi ne radi primarne dijagnoze, već je već u procesu liječenja. Primarna dijagnostika su serološke studije (oni određuju nivo antitijela na HIV). Ako se lažno pozitivan rezultat ponovi, to može biti s niskim virusnim opterećenjem.
PCR dijagnosticira HIV kada još nema antitijela na njega. ELISA metoda u ovom slučaju neće dati odgovor.
I PCR na HIV će već biti pozitivan. Ali simptomi ovog perioda HIV-a su nespecifični. Bolesnika prvo dugo i bezuspješno liječi od ARVI kod liječnika opće prakse. Treba imati na umu da se dijagnoza HIV-a zasniva samo na tomePCR se ne stavlja, potrebno je proći druge sveobuhvatne testove. PCR metoda je češće pomoćna u teškim slučajevima.
Priprema za analizu
Prije uzimanja PCR-a na HIV, 2 dana prije testa, ne treba jesti masnu hranu, alkohol. Također je bolje ne naprezati se psihički i fizički. Ukoliko je pacijentu propisan kurs imunostimulacije, on se prekida 2 sedmice prije analize.
Krv je najbolje uzeti ujutro. Mogu se ispitati i druge biološke tekućine u tijelu (sperma, vaginalni sekret), ali krv je najbolji materijal. Pljuvačka, znoj, urin i suze se ne koriste, jer je sadržaj virusa u njima minimalan.
Plusi PCR-a za HIV
Prednosti metode su izuzetno mala vjerovatnoća lažno pozitivnog rezultata, univerzalnost reakcije za sve biološke tekućine u tijelu. Analiza ima širok raspon:
- Jedno vađenje krvi može se koristiti za otkrivanje različitih infekcija.
- Tehnika je hitna, rezultat je spreman već sljedeći dan.
- Povjerenje je između 85 i 98%.
- Prisustvo HIV-a se može utvrditi 10-14 dana nakon infekcije (u ovom trenutku još nema antitela).
- Bez starosne granice, može se izvoditi odmah od rođenja.
Nedostaci metode
Nedostaci PCR-a su sljedeći:
- Cijena analize.
- Zahtijeva sofisticiranu medicinsku opremu.
- Zahtijeva visoko kvalifikovanog laboratorijskog asistenta i doktora,analiza korisnika.
- Reakcija je vrlo osjetljiva, tako da greška može biti 20%.
- Može rezultirati lažno pozitivnim rezultatom ako pacijent ima autoimune procese, onkologiju, kronične infekcije.
- Neophodna je posebna čistoća laboratorijskih prostorija, jer virus u analizu može ući iz vazduha. Tada će rezultat biti pogrešan.
Za laboratorije koje provode PCR, radi poboljšanja kvaliteta dijagnostike, razvijene su posebne stroge mjere prema SanPiN sistemu za internu kontrolu. Osim toga, moraju se poštovati sva pravila rada sa ovom tehnikom:
- Obavezno striktno pratiti informacije na epruvetama.
- Pre uzimanja uzorka krvi, pogledajte ponovo i uverite se da je analiza zakazana.
- Sestra mora ispravno označiti epruvete.
- Laborant mora ispravno izvršiti sve manipulacije sa biomaterijalom kako bi se spriječila unakrsna kontaminacija.
- Test sistem mora biti odličnog kvaliteta.
Samo ako su ispunjeni svi ovi uslovi, greška u odgovoru može biti samo oko 2% epizoda.
Trajanje analize
Mnoge zanima koliko dugo će biti spreman PCR za HIV. Dijagnoza ne traje duže od 8 sati. Pacijent može dobiti odgovor već sljedećeg dana. Ekspresno testiranje se vrši u roku od 2 sata.
PCR pouzdanost
Uprkos mnogim prednostima, PCR se ne smatra idealnom dijagnostičkom metodom. Kontaktira se u slučajupotreba za pribavljanjem skrining testova na prisustvo HIV-a u tijelu.
Kada se uzima krv na analizu?
Koliko dugo treba uzeti PCR za HIV? Pouzdan rezultat se može dobiti već pri vađenju krvi 4-4 dana nakon navodne infekcije. Nakon 2 sedmice, pouzdanost za HIV će biti 98%, a sa periodom od 5 dana - 80%. Prisustvo negativnog rezultata PCR-a na HIV će biti pouzdano, ali za apsolutno tačan rezultat, takođe se radi ELISA.
ELISA analiza će biti efikasna samo ako postoje antitijela na virus, ovo vrijeme može trajati od 1-3 mjeseca do šest mjeseci. Budući da ELISA daje veću vjerovatnoću (98% -99,9%), PCR se ne može nazvati 100% potvrdnim testom za prisustvo HIV infekcije. Ali s druge strane, ovo je jedina tehnika u kojoj ne morate čekati pojavu antitijela.
Kod HIV-a, PCR može pružiti informacije o efikasnosti ART-a, stadijumu HIV bolesti i broju VN (kvantitativna procjena prisustva HIV-a u tijelu). Ovo će govoriti o ozbiljnosti i obimu promjene.
PCR testiranje na HIV je takođe neophodno ako postoje antitela u krvi, ali njihovo prisustvo ne ukazuje na klinički pouzdanost HIV infekcije.
Testiraju se ne samo na infekciju i slučajni seks. Ostale prilike:
- Planiranje trudnoće.
- Predstojeća operacija.
- Povremeni seks.
- Neke profesije zahtijevaju ovaj test za prijem na posao (nastavnici, ljekari i drugo medicinsko osoblje).
- Zatvorenici.
- TBC pacijenata.
- Zaposleni u Ministarstvu za vanredne situacije i policiji.
- Vraćeno sa odmora iz egzotičnih zemalja (ako želite da budete sigurni da nema infekcije).
- Prostitutke.
- Strani studenti.
- Droge.
Takođe, određeni simptomi kod pacijenta mogu prisiliti na testiranje na HIV:
- Nagli gubitak težine.
- Proljev koji traje više od 3 sedmice
- Nerazumno visoka temperatura dugo vremena.
- Otečeni limfni čvorovi.
- Neobjašnjivi uzrok upale pluća, kandidijaze, itd.
Dešifriranje analize je prerogativ ljekara, a ne laboratorijskog asistenta.
PCR ili ELISA, što je bolje?
Kada se kvalitativno i kvantitativno detektuje PCR-dijagnostika RNK virusa HIV-a. Ova analiza jasno identifikuje specifičan patogen čak i ako postoji više patogena koji unakrsno reaguju. Biološki materijal se može koristiti čak iu osušenom obliku. Loša strana je visoka osjetljivost PCR-a, kada se lažno pozitivan rezultat može dati prisustvom čak i male količine stranog DNK na instrumentima ili epruveti.
Zadatak i mogućnost ELISA-e je da utvrdi prisustvo antitijela na retrovirus. Iako je njegova tačnost 99%, nije primjenjiv u ranim fazama.
Kvalitativno testiranje na HIV
Visokokvalitetni PCR za HIV utvrđuje prisustvo virusa u tijelu. Rezultati će u ovom slučaju izgledati ovako: pozitivni, lažno pozitivni, negativni. Ali ova studija neće dati informacije o količini retrovirusa. Ovakva kvalitativna analizaneprikladno kada je HIV infekcija već otkrivena u tijelu na drugi način.
Nemoguće je kontrolisati efikasnost tretmana visokokvalitetnim PCR-om.
HIV kvantifikacija
Izvode samo osobe zaražene HIV-om kako bi se izbrojao broj kopija virusne RNK u biološkom proizvodu.
Svrha takve studije je praćenje tekućeg liječenja i utvrđivanje otpornosti virusa na njega. Antivirusnu terapiju u takvim proračunima ne propisuje slijepo ljekar, pa će biti efikasnija. Kvantitativni PCR za HIV infekciju se radi mnogo češće. Ova analiza se prikazuje kao kopija/ml krvi.
Koji rezultati se mogu dati:
- Virusna RNA je odsutna ili je vrlo mala (oko 20 kopija/ml). Nema sigurnosti dijagnoze.
- Od 20 - do 10 do 6. stepena kopija / ml - dijagnoza je pouzdana.
- Više od 106 kopija/ml - visoka VN.
Laboratorije mogu izvršiti PCR testiranje na HIV u realnom vremenu. To podrazumijeva posmatranje i numeričku evaluaciju akumulacije PCR proizvoda uz automatsko snimanje rezultata.
